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酿酒酵母培养基配方与酵母细胞培养和表达方法

※发布时间:2017-10-13 11:28:21   ※发布作者:habao   ※出自何处: 

  所有的液体培养基需用磷酸缓冲液配制:Na2HPO4-7H2O, 10.19g/L, NaH2PO4-H2O 8.56g/L. 称量好所需组分,先把氨基酸、氮源等添加到水中,再添加糖最后添加10X的磷酸缓冲液。液体培养基的PH需在6.25左右。

  培养基的种类:应用最广泛的酿酒酵母培养基是YPD培养基(酵母粉、蛋白胨、葡萄糖),单克隆在YPD上的生长通常受尿嘧啶、精氨酸和色氨酸的。额外的添加这些组分克隆的形成将会加快加大。合成培养基由盐(基本氮源和硫酸胺)碳源(比如葡萄糖)和其他组分(核苷酸和氨基酸)组成。合成培养基可以用drop in” 或者“drop out” 的策略筛选特定原养型菌株

  这种培养基是成分确定的营养丰富的培养基,其中添加很多氨基酸和核苷酸来支持菌株的生长。菌株可以在这种培养基中快速生长,接近在YPD平板上的生长速度,“Drop out”培养基通常称为完全合成培养基,简称SC,缺失某一种氨基酸或者核苷酸可以选择特定的原养型。

  “Drop in”培养基仅包括基本的组分(盐和汤)和菌株生长所需的特定氨基酸和核苷酸。菌株必须用这些需分合成大部分生长所需的前体。“Drop in”培养基通常称为葡萄糖合成培养基,简称SD。简单的组分降低了成本并且容易配置,但是克隆形成时间将会慢两倍。并且SD培养基不易保存(4℃放置两个月即失效)

  酵母菌株可以以穿刺菌、液体饱和培养物、平板的形式保存,有些时候甚至可以保存在Whatman滤纸上。收到菌株后最好摇一批新鲜的菌液冻存甘油菌。虽然酵母可以在4℃平板上放置几个月仍然可以存活,然而存活的菌株多样性却在下降。为了避免部分菌株的富集导致群体性质与原来相比出现偏离,接到菌株后需要马上冻存。

  你会注意到,有一些微小菌落(通常占群体的1 -10%)在丰富培养基上生长缓慢(在非发酵性碳源培养基中不能生长,比如葡萄糖)。这些微小菌落在YPD培养基上呈现典型的牛奶白色,而正常的克隆则呈奶油色。这种现象可以通过保存甘油菌避免

  酵母菌株可以在含15%甘油的YPD中保存数年,不需在干冰/乙醇上快速冷冻。要确保冷冻前菌液和甘油培养基混合均匀。

  需用新鲜培养的细胞冻存菌种,可以从固体平板上挑取菌落冻存(挑取火柴头大小的一块)或者取液体培养的菌株(离心取大约5 x 107 个细胞)。可以直接从选择培养基上取菌株用YPD/甘油冻存

  1. 从-80取甘油菌划SD-CAA(菌或者二配体酵母)或者YPD(只限野生型菌株),30度培养2d,挑取单克隆。接种2-5ml SD-CAA or YPD(野生型菌株培养,用于)250rpm,30℃,培养过夜。

  2. 过夜培养菌OD600应该在1-3之间,即使在丰富培养集中也不会超过7,在选择培养基中不会低于1。在倒置显微镜中观察菌株的状态和是否被污染

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